产品货号:
HR0173
中文名称:
叶绿体蛋白提取试剂盒(2D电泳用)
英文名称:
Chloroplast protein extraction kit(2D electrophoresis)
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织,如叶片、根、种子等植物组织中提取叶绿体蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。提取的蛋白样品中不含盐,可以直接用于等电聚焦、双向电泳等。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解植物叶绿体组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。
如下游实验不需直接用于等电聚焦、双向电泳,可选用我公司用于WB、普通蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验的其他试剂盒。
本试剂盒采用非酶法提取,提取过程简单方便,速度快,可在1小时内完成,而且绝少交叉污染,但是蛋白回收率相比酶法较低。酶法提取制备的蛋白,回收率稍有提高,蛋白纯度高,保持天然活性,但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒,可以选择非酶法的提取试剂盒,对提取速度没有要求的话,可以选择酶法提取试剂盒。请根据实际需要选择试剂盒。
- 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
- 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
- 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
组分 | 50T | 100T |
组分A:叶绿体蛋白提取液A | 100mL | 200mL |
组分B:叶绿体蛋白提取液B | 15mL | 30mL |
组分C:蛋白酶抑制剂混合物 | 100μL | 200μL |
保存:蛋白提取液2~8℃,蛋白酶抑制剂-20℃,提取液A长期不用请置-20℃,有效期1年。
- 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2~8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
- 蛋白酶抑制剂在2~8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
移液器、离心机、涡旋混匀器、振荡器、Dounce匀浆器、PBS、100μm细胞筛。
- 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
- 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
- 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
- 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
- 提取液制备:
每300μL提取液B中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
注:
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。 - 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200~500mg植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎,加入1mL提取液A后用匀浆机充分匀浆或者用Dounce匀浆器充分匀浆。
注:
● 匀浆尽可能充分。至无明显可见固体。
● 培养细胞直接收集细胞后用Dounce匀浆器匀浆即可,匀浆后加提取液A混匀后直接进行以下步骤离心。
● 处理叶片等组织样本如果没有匀浆机,也可先加少量提取液A后用Dounce匀浆器充分匀浆后再加提取液A混匀。 - 将匀浆用100μm细胞筛过滤。
注:
● 液体量少时可以加入1~2mL PBS混匀后再用细胞筛过滤。
● 没有细胞筛时可以不过滤,将匀浆液静置1分钟,待大块的没有破碎的组织块自然沉降,吸取上清。
● 部分黏液较多的植物样本可能难以吸取,可以将1mL吸头的口剪掉一点再吸。 - 将滤液在200×g条件下离心3分钟,弃沉淀,收集上清。
- 在800×g条件下离心5分钟,弃沉淀,收集上清。
- 在3000×g条件下离心10分钟,弃上清,收集沉淀。
- 在沉淀中加入200~300μL提取液B,充分混匀。
- 置振荡器2~8℃振荡30分钟。
注:
● 用振荡器/摇床的较低转速,保持液体有轻微晃动即可。
● 没有低温振荡条件可以不振荡,在2~8℃静置,稍微延长处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。 - 在4℃,12000×g条件下离心15分钟。
- 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即得到叶绿体蛋白。
- 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
注:
● 建议用BCA法进行蛋白定量。
● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
- 蛋白浓度低?
叶绿体蛋白丰度比较低,在条件允许的情况下,尽可能增加样本量。
处理部分样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当增加试剂A的匀浆次数,并适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。 - 用什么方法定量蛋白?
建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。
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